マウス腹腔内マクロファージの採取方法

免疫関連の研究を行う場合、実験動物からマクロファージを採取することがあります。
ここではマウスの腹腔内からマクロファージを採取する方法を解説します。

準備物

• PBS 10mL（4℃に冷やしておく）
• 26G針付き10mLシリンジ1本
• 18G針1本
• 15mLファルコンチューブ1本
• 70%エタノール（消毒用）
• 麻酔薬（イソフルランなどの吸引麻酔のほうが良い。腹腔内投与するものはあまり良くないと思う）

プロトコル

1. マウスに麻酔をかける。
2. 70%エタノールでマウスの腹を消毒する。
3. 10mLシリンジにPBSを取り、マウスに腹腔内注射する。
4. マウスの腹を10秒ほど軽くマッサージする
5. マウスを直立するように持ち、ピンセットで18G針をつまんで、針の根元側が下に向くようにマウス腹腔に刺す。
6. 針からPBSが漏れ出てくるので、15mLファルコンチューブで回収する。氷上に一時保管する。

マクロファージ回収後の処理方法

1. 1,000 rpmで5分間遠心する。
2. RBC lysis buffer 1mLを加えて室温で4分間静置する。
3. 再度1,000 rpm、5分間遠心する。
4. 上清を捨て、PBS 1mL加えて懸濁する。

これでマウス腹腔内マクロファージのPBS懸濁液が得られます。
なお、成体マウス1匹あたり1〜3x10^6 cells程度得られる場合が多いです。
このうち、60〜70%程度がマクロファージで、そのほかリンパ球などが含まれます。

マクロファージ採取のコツ

あまり強くマッサージするとマウスにストレスをかけてしまうので注意してください。
PBS回収をスムーズに行うためには18G針を上手に刺すことがポイントです。
マウスは直立させてください。
針の刺す深度は浅すぎず深すぎず、針の先端の位置を感じ取りながら調節し、PBSの排出口（つまり針の根元）が下を向くようにしてください。
針を刺す位置は腹腔の下のほうが良いでしょう。