1X TE bufferの作り方

DNAやRNAを溶解するために使うTE bufferの作り方を紹介します。

TE bufferとは、Tris-EDTA bufferの通称です。
Trisは液のpHを適切な範囲内に安定させるバッファーの役割、
EDTAは2価金属イオンをキレートして、ヌクレアーゼを不活性化し、DNAやRNAの分解を抑える役割を持っています。

ここでは、希釈しないでそのまま使える1X TEバッファーの作り方をご紹介します。

1X TE bufferのレシピ

準備物

• 1M Tris-HCl buffer (pH 8.0)
• 0.5M EDTA水溶液 (pH 8.0)
• ミリQ（蒸留水）

1M Tris-HClや0.5M EDTAはストックしているものを用いるのがよいでしょう。

作り方（プロトコル）

1. 900mL程度のミリQをビーカーに入れる。
2. 10 mLの1M Tris-HClと2 mLのEDTA水溶液を加える。
3. ミリQで1Lにメスアップする。
4. 121℃、15分間オートクレーブする。

完成したTE bufferは常温で保存可能

1X TE bufferの組成

• 10mM Tris
• 1mM EDTA

pHは8.0になります。

TEバッファーの役割

TEバッファーの役割は、冒頭に書いたとおり、DNAやRNAの分解を防いで安定的に長期保存させることです。
EDTAはCa2+やMg2+といった金属イオンをキレートし、DNaseやRNaseの活性を抑制させます。
ただし、RNase A（DNA抽出の際に、不要なRNAを分解させるために添加することがあります）は金属イオンを必要としないため、EDTAによって活性を阻害されません。

DNAの溶解にはpH8.0のTris-HClが、RNA用にはpH7.4程度のTris-HClが使われる場合もあります。
RNAの溶解にはTEではなく、RNase-freeの超純水が使われる場合も結構あります。

私自身、RNA(mRNA)はPCRで使うことが多く、基本cDNAに逆転写します。
RNA自体はTE bufferではなく、RNase-free waterで溶解し、-80℃保存します。これでとくに問題はありません。
cDNAはTEで希釈します。

TEバッファーのデメリット

TEバッファーのデメリットは、高濃度のEDTAだとPCRの酵素反応が阻害されて、PCRがかからない可能性があることです。
これはPCRのDNAポリメラーゼの作用に金属イオンが必要だからです。
とはいえ、市販のPCR試薬（SYBR Greenなど）の説明書どおりの組成で行えば、EDTAの悪影響を心配することはないでしょう。