Oil Red O（オイルレッドO）染色失敗しないプロトコル

Adipocyteに分化した3T3-L1細胞に蓄積した脂質を簡単に染色する方法としてold red O染色があります。
プロトコルは簡単であり、画像的にも油滴の蓄積が明確に分かるので、広く用いられている方法です。

 

また、画像撮影後は染料を溶媒に溶出させ、その吸光度を測ることで油滴の蓄積量を半定量化することもできます。

準備物

1. オイルレッド O ストック溶液：30mgのオイルレッドOを10mLのイソプロパノールに溶かします（完全には溶けません）。 室温遮光保存します。
2. 4%パラホルムアルデヒド(4%PFA)：10%ホルムアルデヒドでも良いと思います。適当な固定液であれば何でもよいでしょう。
3. ワットマンのろ紙(No.1)もしくは滅菌フィルター
4. 60%イソプロパノール：イソプロパノールと蒸留水を3:2で混合。
5. ヘマトキシリン溶液（核染色を行う場合）

プロトコル

6 wellディッシュに培養した場合を想定しています。
他のサイズの場合は、加える試薬量を適宜調節してください。
なお、反応は全て室温で行います。

なお、オイルレッドO染色液を調製したら速やかに使わなければならないので、PFA固定が終わる少し前に調製するのがベストタイミングです。

 

成熟脂肪細胞に分化させた3T3-L1 adipocyteのoil red O染色画像です。
油滴が鮮やかな赤色に染色させています。

こちらは前駆細胞の3T3-L1 preadipocyteです。
ほとんど染まっていませんね。

 

なお、どちらもヘマトキシリン染色は施していません。

Oil red Oの半定量化プロトコル

 

3T3-L1 preadipocyteとadipocyteの吸光度のグラフ。

 

※注意点
オイルレッドO溶液は、かなり染色力が強く、気をつけないとあちこちを赤く染めてしまいます。
気をつけないと結構悲惨にことになってしまいます・・・
吸い取るときは、1000uLマイクロピペットで注意深く吸い取り、廃液はまとめておくのが良いと思います。