細胞培養実験プロトコル

細胞培養実験で水溶性でない薬剤を溶かすために、DMSOがよく用いられます。ただ、DMSOは細胞毒性があるので、培地にあまり大量に添加したくありません。DMSOの濃度はどのくらいまで許容範囲か？ということが時々話題になります。細胞の種類にもよると思うのですが、1%(v/v)でも問題ない場合が多いです。...

ウシ胎児血清(FBS)の非働化の方法についてはラボによって多少流儀は違いますが、標準的と思われるプロトコルを以下に記載します。ぶっちゃけ、ちゃんと細胞が育ち、実験系がワークすれば問題ありませんので、ささいな点での違いは気にせず、ラボの流儀に従えばよいと思います。凍結保存していた血清のボトルを４℃の冷...

単核細胞であるC2C12 myoblastを多核細胞のmyotubeに分化させるときの方法を紹介します。高めの倍率で観察すると、筋細胞がピクピクと収縮する様子が見られて面白いです。準備試薬などC2C12myoblast細胞培養ディッシュDMEM（高グルコース）P/S（ペニシリン=ストレプトマイシン）...

接着細胞培養で大事なのは、細胞をディッシュ・プレート中に均一に播くことですね。ですが、均一に細胞を播種するには多少コツが要り、ちょっと苦手な人もいるのではないでしょうか。ここではそのコツを紹介したいと思います。1wellの面積が大きい場合（12ウェルプレートくらいまで）培地を入れたwellに、ピペッ...

細胞培養で必要なディッシュ・プレートの底面積（培養面の表面積）と、推奨される培地の量を一覧にしました。数値はCorningのものを使用していますが、基本的には他社のディッシュ・プレートにも流用できます。細胞培養プレートwell数底面積(cm2)推奨培地量(mL)6 well9.51.9-2.9 [2...

培養細胞の免疫染色(ICC; immunocytochemistry)のプロトコルを紹介します。ラボによって使用する試薬や濃度が違いますが、それぞれの作業の順序や目的は共通しているはずです。ここでは、サイト作成者である私が主に用いている方法を紹介します。準備試薬PBS固定液：4%パラホルムアルデヒド...

MTTアッセイは培養細胞の生存率や増殖率を調べる実験で、通常96ウェルのプレートを利用して行われます。このプロトコルや実験のコツ・注意点について解説します。準備試薬MTT溶液:PBS50mLに対し250mgのMTT(Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide M2128 S...

トリプシン/EDTAで接着細胞をディッシュから剥離するとき、上手くはがれないので困っている方へ！継代のためなど、トリプシン/EDTA（以下、トリプシンと略します）処理は培養細胞をディッシュなどからはがすときによく行われる処理ですね。ですが、初心者の方だと細胞が全部はがれず、大量の細胞がディッシュに残...